O enredo do jogo reconta os acontecimentos de Resident Evil 2 e Resident Evil Code:Veronica, com um terceiro ato que une os dois. Para o segmento Resident Evil 2, o jogador assume o controle dos protagonistas Leon S. Kennedy e Claire Redfield, com Sherry Birkin atuando como acompanhante em um capítulo. O capítulo Code: Veronica apresenta Claire, acompanhada pelo colega prisioneiro da Ilha Rockfort, Steve Burnside, e mais tarde por seu irmão Chris Redfield.
Resident Evil: The Darkside Chronicles é um jogo de tiro sobre trilhos e o segundo título exclusivo para a plataforma Wii da série Resident Evil. O jogador não controla o movimento do personagem, mas apenas o aspecto do tiro, mostrado na perspectiva de primeira pessoa. O parceiro do jogador também é mostrado na tela e existe uma opção cooperativa para dois jogadores.